二、操作技术1.浅表皮肤刮片:
●(根据需要)修剪被毛，暴露病变皮肤
●矿物油擦拭刮片区域，去除皮肤表面的碎物以利于刮片的进行
●持一钝性手术刀片，垂直于皮肤，用适量的力度沿毛发生长的方向进行刮片取样
●如果寻找疥螨，较大面积刮取(1-2英尺)可增加疥螨发现的可能性，因为疥螨生活在皮肤浅层，因此没有必要一直刮取到渗血为止。最常检出疥螨的区域包括耳缘、肘后。一些报告还称，猫患蠕形瞒时最常检测出的部位是肩两侧
2.深层皮肤刮片:
●选择脱毛区域(如果可能) ，毛发较多时可进行修剪以暴露皮肤
●持一钝性手术刀片，垂直于皮肤，用适量的力度沿毛发生长的方向进行刮片取样
●重复几次刮片后，皮肤会呈现粉红色，此时可见毛细血管及真渗出的血液，这样做的目的是保证收集的病料来自于皮肤的深层，包含毛囊内的蠕形瞒
●挤压刮取处的皮肤使毛囊内的蠕形瞒出现在皮肤浅表，这样更有利于病原微生物的采集
●如果刮片过程中没有收集到少量血液，那么蠕形螨可能会离开毛囊，从而导致(再次取样时)出现假阴性。某些情况如外伤性或感染性的瘢痕形成，刮片很难进行到皮肤深层，进而导致很难收集到大量的蠕形螨，但这样的情况比较少见，可通过活组织检查发现毛囊内的蠕形螨。
3.直接压片:
●湿性分泌物主要采取于脓包、溃疡、靡烂、漏道性皮肤损伤或皮肤表面的痂被被去除后暴露的潮湿性皮肤表面。
用载玻片的一角或注射针头产生机械性丘痊样损伤，然后挤压损伤处产生湿性分泌物。多次用载玻片黏贴藓化样病变部位或用干燥手术刀片收集病料后将病料展到干燥的载玻片上来进行酵母性皮肤病的取样。
●无论是用何种技术，务必风干载玻片
●用商业化的细胞染料对干燥的载玻片进行染色处理(改良的瑞氏染色DiffQuik最常用)并轻轻冲洗
●低倍镜下扫描载玻片，选择一理想区域进行高倍镜检查(40x物镜或者1OOx油镜)，确认每个细胞、细菌、真菌的类型
4.细针抽吸
●选择针头(22-25ga) 和针筒(6cc)进行组织样吸取，针筒越小提供的负压越大
●(根据需要)用酒精或洗必泰清洁待抽吸部位。
A: 固定病变区域，注射器针头刺向病变中心，回拉注射器柄产生负压，松开注射器柄，调整针头方向，再次回拉注射器柄，当发现针头尾部出现血液肘，停止回拉注射器(血液会稀释细胞样品)。
B: 注射器针头刺入病变区域，(取出)重新调整方向，再次刺入，重复该过程。这种技术可以减少血液的稀释作用，更适用于软组织病变。
●在退出注射器之前，松开注射器柄，消除负压
●分离针头与针柄，回拉针柄，重新连接针头、针筒，快速推动针柄，将针头组织样品吹于载玻片上，重复该过程几次
●涂片并染色处理
●低倍镜下扫描整个载玻片，选择一理想区域进行高倍镜观察，使用高倍镜(40X物镜或者100x油镜)观察浸润的细胞类型和异性细胞
5.透明胶带:
●准备一段2-3英尺的透明胶带
●将胶带反复黏贴在病变处
●将胶带粘贴在玻璃载玻片上
●(根据需要)染色，注意:该过程不需要进行第一步的乙醇染色(会移去胶带)
●胶带可充当盖玻片，在高倍镜下查找微生物。透明胶带观察螨虫显微镜检查病原微生物时，胶带法是一种很好的用于采集姬鳌螨和虱子样品的检测方法，姬鳌螨体型较大，在视野中易于发现， 因此，一张胶带有时就高可能收集到姬整螨，并且胶带有利于姬鳌螨的固定。
胶带观察毛发
胶带可以固定载玻片上毛发的位置，样品在低倍镜下观察(4X-10X物镜) ,在片上加一滴矿物油更有利于观察。
胶带观察酵母菌
尽管没有培养基那么有效，但是胶带法仍然是诊断马拉色菌性皮肤病最有效的手段之一，快捷而简单，虽然这种方法高效，但是所高的酵母菌采集技术常常会出现假阴性结果。
6.耳拭子检查:
●将棉签轻轻插入耳道，旋转
●(如果需要)用矿物油将从耳道内取出的黑色蜡样物质进行溶解，用棉签搅拌，在载玻片上抹片
●如果是脓性分泌物，在载玻片上轻微的滚动棉签
●风干脓性分泌物涂片，细胞学染液进行染色(改良瑞氏染液：Diff Quik7)
●低倍镜下观察整个片子以找到螨虫感染的证据，一般而言，耳螨比较容易找到，但是，下调聚光器、浏览整个片子可以会增加发现耳螨的可能性。
如果棉签仅仅收集到少量且干净的样品，那么这个耳朵有可能是健康的
如果样品螨虫非常具有意义(耳瞒、蠕形瞒)
如果样品为浅棕色或脓性渗出物，应进行细胞学检查以鉴别细菌和酵母菌的存在。
耳道细胞学检查对于确定继发感染的类型、治疗方案的合理选择非常有必要，另外，耳道细胞学检查对于治疗效果的评价也具有一定的意义，特别是针对没有完全治愈的耳炎，在这些病例中，耳道分泌物细胞学检查能够确定微生物的数量和类型有没再增加，这在治疗过程的过早中止或者具有重要的意义。
7.真菌检测培养基法
●将真菌检测培养基恢复到室温(在接种样品前将培养基保持在室温高利于加快真菌的生长)
●用酒精擦挝、消毒取样区
●等待酒精干燥
●用无菌镊子收集病变处毛发、鳞屑、痂皮，收集伍德氏灯检查呈现阳性的毛发可增加诊断的准确性
●接种收集的样本与室温状态的培养墓上，注意不要将样本置于培养基中，具有较大且可移动盖子的培养基更有利于样晶的沉积(标准的有盖培养皿)
●对无明显损伤的动物(亚临床携带者) ，可用这一新的毛刷刷物动物整个被毛，收集样品，然后接种到培养板上
●病变爪的培养可以通过下面的方式进行: 剪掉病变趾/指，修剪表面得到一定的样品，接种到培养基上。生长于角蛋白结构上的皮肤真菌会引起特征性的甲营养不良表现。
●每天检查DTM培养基，持续2-3周。皮肤真菌感染的动物样品，培养基会很快的出现白色/浅黄色蓬松样结构。一些污染物也会使培养基变成红色， 但是这种现象是几天以后才会发生的事情。如果培养基不是每天都观察，那么就不可能对真菌菌落生长造成的培养基颜色变化进行一个很好的评估，真菌在培养基上生长几天后，就会出现大甩子， 温度适直、环境潮湿高利于分生孢子的形成。
●用透明胶带轻轻的接触将要进行评估的培养基上生长的真菌菌落，然后将胶带黏贴于载玻片上，滴加细胞染色液进行染色
●检查载玻片以发现真菌的类型，大分生孢子在低倍镜(10X)下通常非常明显。犬身上出现犬孢子常常是继发于环境周围存在不表现临床症状的携带真菌的猫。毛癣菌或小孢子菌提示真菌感染是周围环境引发的(猫除外)。
8.拨毛
●拨取少量待检查毛发
●用矿物油或透明胶带固定毛发样品
●低倍镜下观察样晶(4X/10X)
发尖：
发尖的评估主要目的是观察机体物是否处于瘙痒状态(特别是猫)、是否为非创伤物毛发发尖通常是折断的、能够很容易辨认，这在主人没奋发现猫瘙痒而实际上猫已经处于瘙痒状态的情况来说具有非常重要的意义。
发根:
发根的检查可诊断毛发的生长期和静止期从而确定毛囊周期是否正常，对多数动物而言，大部分的毛发处于静止期，只有一小部分毛发处于生长期。在一些生长期很长的动物(如贵宾犬) ，大部分的毛发可能处于生长期，相对少量的毛发处于静止期。在静止性脱毛疾病中，所高的毛发都处于静止期。
毛干:
在真菌感染的患畜，有时可以看到毛外癣菌。毛外癣菌比较难以发现，可用KOH和细胞染液将过多的角蛋白溶解掉。毛发的皮质看起来膨胀、有损伤，如果折断则有缺口(像扫帚样) ，病原微生物(小球形结构)可能会围绕毛干损伤的周围。毛干也可用于色素形成的观察，毛干上色素
形成通常提示色素突变稀释性脱毛和毛囊发育不良。卵也有可能发现与毛干上，主要为莎拉堤拉恙虫和虱子的粪便。毛干上真他异常也见报道，但较少。
